实验简介

18S rDNA是编码真核生物核糖体小亚基rRNA的DNA序列，在结构上分为保守区和可变区，保守区反映生物物种间的亲缘关系，高变区反映物种间的差异。18S双向测序是基于高通量测序技术，利用特定引物对环境中真核生物的18S rRNA基因进行扩增，然后通过测序技术获取序列信息，并比对到目标数据库，从而分析真核生物群落多样性的方法。

实验流程

DNA提取-PCR扩增-纯化与测序文库构建-测序-数据分析与序列比对

双向测序优势

在测序过程中使用正反2个引物，通过2次反应分别读出2个互补的峰图，并拼成最终的测序结果。在这个过程中，两个峰图的认读结果相互配对，组成最终的序列，在单链测序过程中产生的小错误也能在匹配后被发觉并得到修正，从而提高测序结果的准确性和可靠性。

应用领域

生态环境研究：可用于研究土壤、水体、空气等环境样本中真核微生物的群落结构和多样性，了解生态系统的健康状况和动态变化。比如分析不同水域中真核微生物的组成差异，以评估水质污染程度。

医学健康领域：在医学领域，有助于鉴定病原微生物，为疾病诊断和治疗提供依据。例如，研究人体不同部位（如皮肤、口腔、肠道等）的真核微生物群落，了解其与疾病发生发展的关系。

农业领域：能了解土壤中真核微生物与作物生长的关系，为农业可持续发展提供支持。例如，通过分析土壤中真核微生物的多样性，筛选出对作物生长有益的微生物，用于生物防治或提高肥料利用率。