实验介绍

荧光法

TUNEL染色（Terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP Nick End Labeling）是一种检测细胞凋亡（细胞程序性死亡）的方法。TUNEL法通过检测DNA断裂末端的游离3'-OH基团，来标记和识别凋亡细胞。使用荧光标记的dUTP，可以在荧光显微镜下直接观察到凋亡细胞。TUNEL染色通过标记DNA断裂的3'-OH末端来检测细胞凋亡。终末脱氧核苷酸转移酶（TdT）将荧光标记的dUTP掺入到断裂的DNA链末端。标记后的凋亡细胞在荧光显微镜下呈现亮点，显示凋亡位置和数量。

DAB法

使用DAB（3,3'-二氨基联苯胺）作为底物，可以在光学显微镜下观察到凋亡细胞的棕色沉淀。TUNEL法通过标记DNA断裂的3'-OH末端来检测细胞凋亡。终末脱氧核苷酸转移酶（TdT）将生物素标记的dUTP掺入到断裂的DNA链末端。随后，使用与生物素结合的过氧化物酶（HRP）和DAB作为底物，产生棕色沉淀，显示凋亡细胞的位置和数量。

实验流程

脱蜡至水--蛋白酶K修复--破膜通透--孵育tunel反应液--DAPI染核--抗荧光素淬灭剂封片-- 镜检拍照。

收样及运输

石蜡切片常温运输；

冰冻切片-20℃运输；

固定后细胞爬片4℃运输；

TUNEL染色（荧光）