慢病毒

慢病毒（Lentivirus）是逆转录病毒科的一员，其感染后潜伏期长、病程缓慢，故称为“慢病毒”。常见的慢病毒类型人免疫缺陷病毒（HIV）、猫免疫缺陷病毒（FIV）、猿免疫缺陷病毒（SIV）、牛免疫缺陷病毒等。其感染机制是通过包膜蛋白（如gp120）靶向宿主细胞受体，逆转录为DNA后整合至宿主基因组，实现长期潜伏。

慢病毒基因组进入细胞后，在细胞浆中反转录为DNA，形成DNA整合前复合体，进入细胞核后，DNA整合到细胞基因组中。整合后的DNA转录成mRNA，回到细胞浆中，表达目的蛋白；或产生小RNA。慢病毒介导的基因表达或小RNA干扰作用持续且稳定，并随细胞基因组的分裂而分裂。

慢病毒载体

基于HIV-1改造，剔除毒性基因（如nef/vpu），保留感染非分裂细胞的能力。慢病毒载体具有感染谱广泛、可转导神经元、干细胞、原代细胞等难转染细胞、长期稳定表达外源基因等优点，因此成为导入外源基因的有力工具。现在慢病毒系统已经被广泛应用到各种细胞系的基因过表达、RNA干扰、microRNA研究以及活体动物实验中。

慢病毒包装

慢病毒包装与生产是通过分子生物学技术将目的基因整合到慢病毒载体中，并借助包装细胞系生成具有感染能力的病毒颗粒的过程。

首先将转移质粒、包装质粒和包膜蛋白质粒转染到293T细胞。更换新鲜的培养基后，继续培养48～72小时。收集培养液，进行离心浓缩后，就可得到转导细胞级别的病毒颗粒。如果您想获得注射动物级别的超纯病毒颗粒，可以利用蔗糖超速离心进一步去除杂质，从而获得纯度更高的病毒颗粒。

包装流程

●　细胞铺板

●　质粒转染

●　病毒收集

●　浓缩纯化

●　滴度测定

●　安全性验证

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