一、实验简介

免疫共沉淀（Co-IP）是一种基于抗原-抗体特异性结合的经典技术，用于研究生理状态下蛋白质间的相互作用。其优势在于能捕获天然构象的蛋白复合物，结果更接近体内真实情况，广泛应用于信号通路、疾病机制和药物靶点研究。

二、实验原理

‌非变性裂解‌：细胞在温和条件下裂解，保留蛋白质间的天然相互作用。‌

抗体捕获‌：靶蛋白（诱饵）的特异性抗体与抗原结合，形成免疫复合物。‌

共沉淀‌：通过Protein A/G磁珠或琼脂糖珠富集复合物，连带沉淀与靶蛋白结合的互作蛋白（如蛋白Y）。‌

检测分析‌：通过Western Blot或质谱鉴定互作蛋白。

三、实验流程（关键步骤）

1‌.样品制备‌：非变性裂解细胞（如RIPA Buffer）。

2.预清除：用Protein A/G珠子去除非特异性结合蛋白。‌

3.免疫沉淀‌：加入靶蛋白抗体孵育，结合Protein A/G珠子富集复合物。‌

4.洗涤与洗脱‌：多次洗涤去除非特异性结合，洗脱目标复合物。‌

5.分析‌：SDS-PAGE分离，Western Blot验证互作蛋白。