一、实验简介

实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR，qPCR）是一种结合传统PCR扩增与实时荧光检测的核酸定量技术，通过监测荧光信号动态反映DNA/RNA的扩增过程，实现高灵敏度、高特异性的核酸定量分析。

根据所使用的荧光标记方法可分为两种：

1. 染料法（SYBR Green I）‌：非特异性结合双链DNA，随产物积累荧光增强。

2. 探针法（TaqMan探针）‌：特异性探针与靶序列结合后，通过荧光共振能量转移（FRET）释放信号。

   
   

二、实验流程

1‌.样本制备‌：RNA样本需反转录为cDNA（RT-qPCR）。‌

2.反应体系配制‌：包含引物、探针/染料、dNTPs、DNA聚合酶及模板。‌

3.PCR扩增与检测‌：仪器实时监测荧光信号，记录扩增曲线。‌

4.数据分析‌：通过标准曲线或ΔΔCt法计算目标基因表达量或病原体载量。

三、主要应用

‌医学诊断‌：病原体检测（如新冠病毒核酸检测）。‌

基因表达分析‌：定量mRNA水平，研究基因调控机制。‌

食品安全与环境监测‌：检测食品中微生物污染或转基因成分。‌

科研领域‌：基因突变筛查、药物靶点验证等。