一、实验简介

1.耐药细胞株筛选

通过长期低剂量药物暴露，诱导细胞产生适应性耐药性。细胞在药物压力下激活耐药机制（如P-糖蛋白表达），逐步提高药物浓度筛选耐药亚群。

典型步骤：

- 测定亲代细胞IC50值，以1/10-1/5 IC50为起始浓度处理细胞。

- 逐步递增药物浓度，筛选耐受性增强的细胞群体。

2.稳转细胞株构建

将外源基因整合至宿主基因组，实现长期稳定表达。通过载体（如慢病毒）携带抗性基因（如嘌呤霉素抗性）转染细胞，加压筛选阳性克隆。

常见类型：‌

基因过表达‌、敲除或敲低某个基因。采用抗性筛选或流式分选获得多克隆或单克隆稳转株。