一、实验简介

细胞免疫荧光（Immunofluorescence, IF）是一种利用荧光标记抗体特异性结合靶蛋白的技术，通过荧光显微镜观察抗原的定位和表达水平。广泛应用于细胞生物学、病理学及药物研发等领域，可检测细胞内/膜蛋白、病原体及信号分子等。

二、实验流程

‌1. 样本制备‌

‌细胞爬片‌：将细胞接种于多聚赖氨酸处理的盖玻片上，培养至60%-70%密度。‌

固定‌：4%多聚甲醛室温固定15分钟，PBS洗涤3次。

‌2. 透化与封闭‌

‌透化‌：0.5% Triton X-100处理10分钟（胞内抗原需透化，膜抗原省略），PBS洗涤3次。。‌

封闭‌：1% BSA或血清室温封闭30分钟，PBS洗涤3次。

‌3. 抗体孵育‌

‌一抗‌：稀释后4℃孵育过夜，PBS洗涤3次。‌

二抗‌：避光下荧光标记二抗室温孵育1小时，PBS洗涤3次。

‌4. 染色与观察‌

‌核染色‌：DAPI染核10分钟，PBS洗涤3次。‌

封片‌：抗淬灭剂封片，

观察：荧光显微镜或共聚焦成像。