一、实验简介

细胞凋亡‌是细胞在基因调控下主动进行的程序性死亡过程，具有独特的形态学和生化特征（如细胞皱缩、染色质凝聚、DNA片段化等）。与坏死（Necrosis）不同，凋亡不引发炎症反应，对维持组织稳态至关重要。

在生物化学上，多数细胞凋亡的过程中，内源性核酸内切酶活化，活性增加。核DNA随机地在核小体的连接部位被酶切断，降解为180-200bp或它的整倍数的各种片断。如果对核DNA进行琼脂糖电泳，可显示以180-200bp为基数的DNA ladder（梯状带纹）的特征。

凋亡机制

二、检测方法

1.早期检测

· Annexin V/PI双染法‌

凋亡早期细胞膜磷脂酰丝氨酸（PS）外翻，Annexin V特异性结合PS（钙离子依赖）；PI仅穿透膜破损的死亡细胞。

· ‌线粒体膜电位检测（JC-1染色）‌

凋亡早期线粒体膜电位（ΔΨm）下降，JC-1染料从红色聚合体（正常状态）转变为绿色单体（凋亡状态）。

· 还原型谷胱甘肽（GSH）检测‌

‌凋亡早期细胞内还原型谷胱甘肽水平降低，导致氧化应激加剧，触发线粒体膜电位下降。

· Caspase检测

Caspase-3通常以酶原形式（32 kDa）存在，凋亡早期被剪切为17 kDa和12 kDa片段，标志凋亡执行阶段的启动。

2.晚期检测‌

· TUNEL法‌

‌标记DNA断裂产生的3'-OH末端，利用末端转移酶（TdT）催化荧光标记dUTP结合断裂点，特异性检测凋亡晚期核小体间DNA片段36。

· LM-PCR Ladder 

‌凋亡晚期DNA被内切酶切割为180-200 bp片段，通过琼脂糖凝胶电泳呈现典型“梯状”条带6。

· Telemerase Detection （端粒酶检测）

‌通过分析端粒酶活性来评估细胞凋亡或永生化状态。

3.形态学检测

· 光学显微镜和倒置显微镜

· 荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜