Seahorse线粒体能量代谢实验服务

哺乳动物细胞有两条关键的能量代谢通路，即有氧呼吸和糖酵解。有氧呼吸主要在线粒体中进行，该过程消耗氧气驱动细胞将营养底物（糖、脂、蛋白质）氧化分解并释放出能量合成大量 ATP，因此线粒体又被称为细胞的“能量工厂”。糖酵解发生在细胞胞浆中，是一种无氧分解过程，主要将葡萄糖分解成乳酸并产生少量 ATP。糖酵解和氧化磷酸化是细胞中两条关键的能量产生途径。大多数细胞具有在这两条途径之间切换的能力，从而适应环境的变化。

“人是铁，饭是钢，细胞活动需能量”，能量代谢驱动细胞功能，在各种关键的细胞过程中发挥重要作用，多个领域的科学家正在应用 XF 技术检测细胞代谢研究相关功能，免疫学研究人员将代谢重编程确定为固有免疫的关键标志；干细胞研究可利用 XF 技术来改善干细胞科学各方面的效率和结果；神经生物学研究人员发现代谢转换与神经退行性疾病之间存在很强的相关性

君礼生物提供Seahorse细胞能量代谢分析实验服务，包括糖酵解、线粒体呼吸等一系列实验服务，详情可以致电联系我们具体询问。

Seahorse XF 细胞线粒体压力测试

耗氧量的检测

实验原理

氧化磷酸化和糖酵解是细胞内两条主要的能量生产途径。大多数细胞具有在这两条途径之间转换的能力，从而适应环境的改变。若细胞是以线粒体有氧呼吸为主，建议进行线粒体压力分析实验，测定线粒体完整功能， 线粒体压力测试实验通过依次加入线粒体电子传递链（ETC）的靶向药物测量细胞的氧气消耗速率（OCR）而得到反映线粒体功能的关键参数。它是基于培养板的活细胞实验，能够实时监测 OCR。

▲加入顺序及 ETC靶点如图

■ 加入寡霉素：ATP合酶抑制剂

■ 加入FCCP：解偶联剂，改变膜通透性

■ 加入鱼藤酮/抗霉素A：电子传递链抑制剂，通过探针与荧光物质检测溶液中氧气消耗速率和氢离子产生速率，测量线粒体代谢关键五个参数：呼吸水平基础值，ATP生成能力，质子渗漏水平，呼吸能力最大值和呼吸能力储备值。

实验参数

呼吸水平基础值，质子渗漏值，呼吸能力最大值，呼吸能力储备值，非有氧呼吸耗氧值，ATP生成能力，偶联速率, 呼吸能力储备值与基础值比。

实验分析

药物分析 → 线粒体呼吸调节剂作用靶点和效果

实验曲线

在加寡霉素之前显示的数值，代表的是细胞的基础耗氧量，包括线粒体氧化磷酸化及质子漏耗氧。即质子在线粒体膜通过呼吸链形成电势能后，一部分质子回流可以通过ATP合酶形成ATP，将势能转化为ATP中的能量。一部分通过线粒体膜但是只是发生氧化，势能转化为热量，但是没有用于合成ATP。

寡霉素是ATP合酶抑制剂，加入此药后减少的耗氧代表的是机体用于ATP合成的耗氧量，间接显示此时细胞的ATP产量。FCCP是一种解偶联剂，作为一种质子载体使得大量质子回流，大量耗氧，但是这种质子回流不能形成ATP，FCCP后耗氧的增加，代表线粒体的最大耗氧能力，间接显示最大的呼吸能力，而其相对与

基础值的高值代表其还具有的呼吸潜力。最后加入是抗霉素A和寡霉素，二者是呼吸链抑制剂，完全阻止线粒体耗氧。